କୋଷ ସଂସ୍କୃତିର ଏକ ମୁଖ୍ୟ ସୁବିଧା ହେଉଛି କୋଷ ପ୍ରଜନନର ଶାରୀରିକ ରସାୟନକୁ (ଅର୍ଥାତ୍ ତାପମାତ୍ରା, pH, ଓସମୋଟିକ୍ ଚାପ, O2 ଏବଂ CO2 ଟେନ୍ସନ୍) ଏବଂ ଶାରୀରିକ ପରିବେଶ (ଅର୍ଥାତ୍ ହରମୋନ୍ ଏବଂ ପୁଷ୍ଟିକର ଏକାଗ୍ରତା) କୁ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ କରିବାର କ୍ଷମତା |ତାପମାତ୍ରା ବ୍ୟତୀତ ସଂସ୍କୃତି ପରିବେଶ ଅଭିବୃଦ୍ଧି ମାଧ୍ୟମ ଦ୍ୱାରା ନିୟନ୍ତ୍ରିତ ହୋଇଥାଏ |
ଯଦିଓ ସଂସ୍କୃତିର ଶାରୀରିକ ପରିବେଶ ଏହାର ଶାରୀରିକ ଏବଂ ରାସାୟନିକ ପରିବେଶ ପରି ସ୍ପଷ୍ଟ ନୁହେଁ, ସେରମ୍ ଉପାଦାନଗୁଡିକ ବିଷୟରେ ଏକ ଉତ୍ତମ ବୁ understanding ାମଣା, ବିସ୍ତାର ପାଇଁ ଆବଶ୍ୟକ ଅଭିବୃଦ୍ଧିର ଚିହ୍ନଟ ଏବଂ ସଂସ୍କୃତିର କୋଷଗୁଡ଼ିକର ମାଇକ୍ରୋ ପରିବେଶ ବିଷୟରେ ଏକ ଉତ୍ତମ ବୁ understanding ାମଣା |(ଅର୍ଥାତ୍ ସେଲ୍-ସେଲ୍ ପାରସ୍ପରିକ କ୍ରିୟା, ଗ୍ୟାସ୍ ବିସ୍ତାର, ମ୍ୟାଟ୍ରିକ୍ସ ସହିତ ପାରସ୍ପରିକ କ୍ରିୟା) ବର୍ତ୍ତମାନ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ସେଲ୍ ଲାଇନଗୁଡ଼ିକୁ ସେରମ୍ମୁକ୍ତ ମିଡିଆରେ ସଂସ୍କୃତି ପ୍ରାପ୍ତ କରିବାକୁ ଅନୁମତି ଦିଏ |
1. ସଂସ୍କୃତି ପରିବେଶ କୋଷ ବୃଦ୍ଧି ଉପରେ ପ୍ରଭାବ ପକାଇଥାଏ |
ଦୟାକରି ଧ୍ୟାନ ଦିଅନ୍ତୁ ଯେ ପ୍ରତ୍ୟେକ ସେଲ୍ ପ୍ରକାର ପାଇଁ ସେଲ୍ ସଂସ୍କୃତି ଅବସ୍ଥା ଭିନ୍ନ ଅଟେ |
ଏକ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ କୋଷ ପ୍ରକାର ପାଇଁ ଆବଶ୍ୟକ ସଂସ୍କୃତି ଅବସ୍ଥାଠାରୁ ବିଚ୍ୟୁତ ହେବାର ପରିଣାମ ଅସ୍ୱାଭାବିକ ଫେନୋଟାଇପ୍ ର ଅଭିବ୍ୟକ୍ତି ଠାରୁ ଆରମ୍ଭ କରି କୋଷ ସଂସ୍କୃତିର ସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ ବିଫଳତା ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ |ତେଣୁ, ଆମେ ପରାମର୍ଶ ଦେଉଛୁ ଯେ ଆପଣ ଆଗ୍ରହୀ ଥିବା ସେଲ୍ ଲାଇନ୍ ସହିତ ପରିଚିତ ହୁଅନ୍ତୁ ଏବଂ ଆପଣ ନିଜ ପରୀକ୍ଷଣରେ ବ୍ୟବହାର କରୁଥିବା ପ୍ରତ୍ୟେକ ଉତ୍ପାଦ ପାଇଁ ଦିଆଯାଇଥିବା ନିର୍ଦ୍ଦେଶକୁ କଠୋର ଭାବରେ ଅନୁସରଣ କରନ୍ତୁ |
2. ଆପଣଙ୍କ କୋଷଗୁଡ଼ିକ ପାଇଁ ଏକ ଅପ୍ଟିମାଇଜ୍ ସେଲ୍ ସଂସ୍କୃତି ପରିବେଶ ସୃଷ୍ଟି ପାଇଁ ସତର୍କତା:
ସଂସ୍କୃତି ମିଡିଆ ଏବଂ ସେରମ୍ (ଅଧିକ ସୂଚନା ପାଇଁ ନିମ୍ନରେ ଦେଖନ୍ତୁ)
pH ଏବଂ CO2 ସ୍ତର (ଅଧିକ ସୂଚନା ପାଇଁ ନିମ୍ନରେ ଦେଖନ୍ତୁ)
ପ୍ଲାଷ୍ଟିକ୍ ଚାଷ କରନ୍ତୁ (ଅଧିକ ସୂଚନା ପାଇଁ ନିମ୍ନରେ ଦେଖନ୍ତୁ)
ତାପମାତ୍ରା (ଅଧିକ ସୂଚନା ପାଇଁ ନିମ୍ନରେ ଦେଖନ୍ତୁ)
2.1 ସାଂସ୍କୃତିକ ମିଡିଆ ଏବଂ ସେରମ୍ |
ସଂସ୍କୃତି ମାଧ୍ୟମ ହେଉଛି ସଂସ୍କୃତି ପରିବେଶର ସବୁଠାରୁ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ଅଂଶ, କାରଣ ଏହା କୋଷ ବୃଦ୍ଧି ପାଇଁ ଆବଶ୍ୟକ ପୁଷ୍ଟିକର ଖାଦ୍ୟ, ଅଭିବୃଦ୍ଧି କାରକ ଏବଂ ହରମୋନ୍ ଯୋଗାଇଥାଏ ଏବଂ ସଂସ୍କୃତିର pH ଏବଂ ଓସମୋଟିକ୍ ଚାପକୁ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ କରିଥାଏ |
ଯଦିଓ ପ୍ରାରମ୍ଭିକ କୋଷ ସଂସ୍କୃତି ପରୀକ୍ଷଣଗୁଡିକ ଟିସୁ ନିର୍ବାହ ଏବଂ ଶରୀରର ତରଳ ପଦାର୍ଥରୁ ପ୍ରାପ୍ତ ପ୍ରାକୃତିକ ମିଡିଆ ବ୍ୟବହାର କରି କରାଯାଇଥିଲା, ମାନକକରଣର ଆବଶ୍ୟକତା, ମିଡିଆ ଗୁଣବତ୍ତା ଏବଂ ଚାହିଦା ବୃଦ୍ଧି ଏକ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ଗଣମାଧ୍ୟମର ବିକାଶ ଘଟାଇଲା |ତିନୋଟି ମ basic ଳିକ ପ୍ରକାରର ମିଡିଆ ହେଉଛି ବେସାଲ୍ ମିଡିଆ, ହ୍ରାସ ହୋଇଥିବା ସେରମ୍ ମିଡିଆ ଏବଂ ସେରମ୍ମୁକ୍ତ ମିଡିଆ, ଏବଂ ସେରମ୍ ସପ୍ଲିମେଣ୍ଟେସନ୍ ପାଇଁ ସେମାନଙ୍କର ଭିନ୍ନ ଆବଶ୍ୟକତା ଅଛି |
2.1.1 ମ Basic ଳିକ ମାଧ୍ୟମ |
ଗିବକୋ ସେଲ୍ ସଂସ୍କୃତି ମାଧ୍ୟମ |
ଅଧିକାଂଶ ସେଲ୍ ଲାଇନ୍ ମ am ଳିକ ମିଡିଆରେ ଆମିନୋ ଏସିଡ୍, ଭିଟାମିନ୍, ଅଜ organ ବିକ ଲୁଣ, ଏବଂ ଅଙ୍ଗାରକାମ୍ଳ ଉତ୍ସ (ଯେପରିକି ଗ୍ଲୁକୋଜ୍) ଧାରଣ କରିଥାଏ, କିନ୍ତୁ ଏହି ମ basic ଳିକ ମିଡିଆ ସୂତ୍ରଗୁଡ଼ିକ ସେରମ୍ ସହିତ ସପ୍ଲିମେଣ୍ଟ ହେବା ଆବଶ୍ୟକ |
2.1.2 ହ୍ରାସ ହୋଇଥିବା ସେରମ୍ ମାଧ୍ୟମ |
ଗିବକୋ ଲୋ ସେରମ୍ ମଧ୍ୟମ ସହିତ ବୋତଲ |
କୋଷ ସଂସ୍କୃତି ପରୀକ୍ଷଣରେ ସେରମ୍ ର ପ୍ରତିକୂଳ ପ୍ରଭାବକୁ ହ୍ରାସ କରିବାର ଅନ୍ୟ ଏକ କ strategy ଶଳ ହେଉଛି ସେରମ୍ ହ୍ରାସ ହୋଇଥିବା ମିଡିଆ ବ୍ୟବହାର କରିବା |ହ୍ରାସ ହୋଇଥିବା ସେରମ୍ ମାଧ୍ୟମ ହେଉଛି ଏକ ମ basic ଳିକ ମଧ୍ୟମ ସୂତ୍ର ଯାହା ପୁଷ୍ଟିକର ଖାଦ୍ୟ ଏବଂ ପଶୁ-ଉତ୍ପାଦିତ କାରକ ସହିତ ଭରପୂର, ଯାହା ଆବଶ୍ୟକ ସେରମ୍ ପରିମାଣକୁ ହ୍ରାସ କରିପାରେ |
2.1.3 ସେରମ୍ ମୁକ୍ତ ମାଧ୍ୟମ |
ଗିବକୋ ସେରମ୍ ମୁକ୍ତ ମାଧ୍ୟମ ସହିତ ବୋତଲ |
ସେରମ୍ମୁକ୍ତ ମାଧ୍ୟମ (SFM) ଉପଯୁକ୍ତ ପୁଷ୍ଟିକର ଖାଦ୍ୟ ଏବଂ ହରମୋନ୍ ସୂତ୍ର ସହିତ ସେରମ୍ ବଦଳାଇ ପଶୁ ସେରମ୍ ବ୍ୟବହାରକୁ ବଞ୍ଚାଇଥାଏ |ଅନେକ ପ୍ରାଥମିକ ସଂସ୍କୃତି ଏବଂ ସେଲ୍ ଲାଇନ୍ରେ ଚାଇନିଜ୍ ହାମଷ୍ଟର୍ ଓଭାରି (CHO) ରେକମ୍ବିନାଣ୍ଟ୍ ପ୍ରୋଟିନ୍ ଉତ୍ପାଦନ ରେଖା, ବିଭିନ୍ନ ହାଇବ୍ରିଡୋମା ସେଲ୍ ଲାଇନ୍, କୀଟପତଙ୍ଗ Sf9 ଏବଂ Sf21 (Spodoptera frugiperda), ଏବଂ ଜୀବାଣୁ ଉତ୍ପାଦନ ପାଇଁ ହୋଷ୍ଟ ପାଇଁ ସେରମ୍ମୁକ୍ତ ମଧ୍ୟମ ସୂତ୍ର ରହିଛି | (ଉଦାହରଣ ସ୍ୱରୂପ, 293, VERO, MDCK, MDBK), ଇତ୍ୟାଦି ସେରମ୍ମୁକ୍ତ ମାଧ୍ୟମ ବ୍ୟବହାର କରିବାର ଏକ ମୁଖ୍ୟ ସୁବିଧା ହେଉଛି ଅଭିବୃଦ୍ଧି କାରଣଗୁଡ଼ିକର ଉପଯୁକ୍ତ ମିଶ୍ରଣ ଚୟନ କରି ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ କୋଷ ପ୍ରକାର ପାଇଁ ମଧ୍ୟମ ଚୟନ କରିବାର କ୍ଷମତା |ନିମ୍ନଲିଖିତ ସାରଣୀରେ ସେରମ୍ମୁକ୍ତ ମିଡିଆର ସୁବିଧା ଏବଂ ଅସୁବିଧା ତାଲିକାଭୁକ୍ତ |
ସୁବିଧା
ସ୍ୱଚ୍ଛତା ବୃଦ୍ଧି କରନ୍ତୁ |
ଅଧିକ ସ୍ଥିର କାର୍ଯ୍ୟଦକ୍ଷତା |
ସହଜ ଶୁଦ୍ଧତା ଏବଂ ଡାଉନ୍ଷ୍ଟ୍ରିମ୍ ପ୍ରକ୍ରିୟାକରଣ |
ସେଲ୍ କାର୍ଯ୍ୟକୁ ସଠିକ୍ ଭାବରେ ମୂଲ୍ୟାଙ୍କନ କର |
ଉତ୍ପାଦକତା ବୃଦ୍ଧି କରନ୍ତୁ |
ଶାରୀରିକ ପ୍ରତିକ୍ରିୟାଗୁଡ଼ିକର ଉତ୍ତମ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ |
ଉନ୍ନତ ସେଲ୍ ମିଡିଆ ଚିହ୍ନଟ |
ଅସୁବିଧା
ସେଲ୍ ପ୍ରକାର ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ମଧ୍ୟମ ସୂତ୍ର ଆବଶ୍ୟକତା |
ଅଧିକ ରିଜେଣ୍ଟ୍ ଶୁଦ୍ଧତା ଆବଶ୍ୟକ |
ଅଭିବୃଦ୍ଧିରେ ମନ୍ଥରତା |
2.2.1 pH ସ୍ତର |
ଅଧିକାଂଶ ସାଧାରଣ ସ୍ତନ୍ୟପାୟୀ କୋଷ ରେଖା pH 7.4 ରେ ଭଲ ବ grow ନ୍ତି ଏବଂ ବିଭିନ୍ନ ସେଲ୍ ରେଖା ମଧ୍ୟରେ ପାର୍ଥକ୍ୟ ଛୋଟ |ଅବଶ୍ୟ, କିଛି ପରିବର୍ତ୍ତିତ କୋଷ ରେଖା ସାମାନ୍ୟ ଅମ୍ଳୀୟ ପରିବେଶରେ (pH 7.0 - 7.4) ଉନ୍ନତ ହେବା ପାଇଁ ଦର୍ଶାଯାଇଥିବାବେଳେ କିଛି ସାଧାରଣ ଫାଇବ୍ରୋବ୍ଲାଷ୍ଟ ସେଲ୍ ରେଖା ସାମାନ୍ୟ କ୍ଷାରୀୟ ପରିବେଶକୁ ପସନ୍ଦ କରନ୍ତି (pH 7.4 - 7.7) |କୀଟ ସେଲ୍ ରେଖା ଯେପରିକି Sf9 ଏବଂ Sf21 pH 6.2 ରେ ସର୍ବୋତ୍ତମ ବ grow େ |
2.2। CO CO2 ସ୍ତର |
ଅଭିବୃଦ୍ଧି ମାଧ୍ୟମ ସଂସ୍କୃତିର pH କୁ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ କରେ ଏବଂ pH ର ପରିବର୍ତ୍ତନକୁ ପ୍ରତିରୋଧ କରିବା ପାଇଁ ସଂସ୍କୃତିର କୋଷଗୁଡ଼ିକୁ ବଫର୍ କରେ |ସାଧାରଣତ ,, ଜ organic ବିକ (ଉଦାହରଣ ସ୍ୱରୂପ, HEPES) କିମ୍ବା CO2- ବାଇକାର୍ବୋନାଟ୍-ଆଧାରିତ ବଫର୍ ଧାରଣ କରି ଏହି ବଫରିଂ ହାସଲ ହୁଏ |କାରଣ ମାଧ୍ୟମର pH ଦ୍ରବୀଭୂତ କାର୍ବନ ଡାଇଅକ୍ସାଇଡ୍ (CO2) ଏବଂ ବାଇକାର୍ବୋନାଟ୍ (HCO3-) ର ସୂକ୍ଷ୍ମ ଭାରସାମ୍ୟ ଉପରେ ନିର୍ଭର କରେ, ବାୟୁମଣ୍ଡଳୀୟ CO2 ରେ ପରିବର୍ତ୍ତନ ମଧ୍ୟମ pH ପରିବର୍ତ୍ତନ କରିବ |ତେଣୁ, ଯେତେବେଳେ ଏକ CO2- ବାଇକାର୍ବୋନାଟ୍-ଆଧାରିତ ବଫର୍ ସହିତ ଏକ ମଧ୍ୟମ ବଫର୍ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଏ, ସେତେବେଳେ ଏକ୍ସୋଜେନସ୍ CO2 ବ୍ୟବହାର କରିବା ଆବଶ୍ୟକ, ବିଶେଷତ when ଯେତେବେଳେ ଖୋଲା ସଂସ୍କୃତି ପାତ୍ରରେ କୋଷଗୁଡିକ ସଂସ୍କୃତି କରାଯାଏ କିମ୍ବା ଉଚ୍ଚ ଏକାଗ୍ରତାରେ ପରିବର୍ତ୍ତିତ ସେଲ୍ ରେଖା ସଂସ୍କୃତି କରାଯାଏ |ଯଦିଓ ଅଧିକାଂଶ ଅନୁସନ୍ଧାନକାରୀ ସାଧାରଣତ 5 ବାୟୁରେ 5-7% CO2 ବ୍ୟବହାର କରନ୍ତି, ଅଧିକାଂଶ କୋଷ ସଂସ୍କୃତି ପରୀକ୍ଷଣ ସାଧାରଣତ 4 4-10% CO2 ବ୍ୟବହାର କରିଥାଏ |ତଥାପି, ସଠିକ୍ pH ଏବଂ ଓସୋମୋଟିକ୍ ଚାପ ହାସଲ କରିବା ପାଇଁ ପ୍ରତ୍ୟେକ ମାଧ୍ୟମରେ ଏକ CO2 ଟେନସନ୍ ଏବଂ ବାଇକାର୍ବୋନେଟ୍ ଏକାଗ୍ରତା ଅଛି |ଅଧିକ ସୂଚନା ପାଇଁ, ଦୟାକରି ମଧ୍ୟମ ଉତ୍ପାଦକଙ୍କ ନିର୍ଦ୍ଦେଶକୁ ଅନୁସରଣ କରନ୍ତୁ |
3.3 ପ୍ଲାଷ୍ଟିକ୍ ଚାଷ କରିବା |
ବିଭିନ୍ନ ସଂସ୍କୃତି ସଂସ୍କୃତି ପ୍ରୟୋଗ ଅନୁଯାୟୀ ସେଲ୍ ସଂସ୍କୃତି ପ୍ଲାଷ୍ଟିକ୍ ବିଭିନ୍ନ ଫର୍ମ, ଆକାର ଏବଂ ପୃଷ୍ଠରେ ଉପଲବ୍ଧ |ଆପଣଙ୍କ ସେଲ୍ ସଂସ୍କୃତି ପ୍ରୟୋଗ ପାଇଁ ସଠିକ୍ ପ୍ଲାଷ୍ଟିକ୍ ବାଛିବାରେ ସାହାଯ୍ୟ କରିବାକୁ ନିମ୍ନରେ ସେଲ୍ ସଂସ୍କୃତି ପ୍ଲାଷ୍ଟିକ୍ ଭୂପୃଷ୍ଠ ଗାଇଡ୍ ଏବଂ ସେଲ୍ ସଂସ୍କୃତି ଧାରଣକାରୀ ଗାଇଡ୍ ବ୍ୟବହାର କରନ୍ତୁ |
ସମସ୍ତ ଥର୍ମୋ ସାଇଣ୍ଟିଫିକ୍ ନଙ୍କ୍ ସେଲ୍ ସଂସ୍କୃତି ପ୍ଲାଷ୍ଟିକ୍ (ବିଜ୍ଞାପନ ଲିଙ୍କ୍) ଦେଖନ୍ତୁ |
2.4 ତାପମାତ୍ରା
କୋଷ ସଂସ୍କୃତି ପାଇଁ ସର୍ବୋଚ୍ଚ ତାପମାତ୍ରା ହୋଷ୍ଟର ଶରୀରର ତାପମାତ୍ରା ଉପରେ ନିର୍ଭର କରେ ଯେଉଁଠାରୁ କୋଷଗୁଡ଼ିକ ବିଚ୍ଛିନ୍ନ ହୋଇଥାନ୍ତି ଏବଂ ତାପମାତ୍ରାର ଆନାଟୋମିକାଲ୍ ପରିବର୍ତ୍ତନ ଉପରେ କମ୍ ପରିମାଣରେ ନିର୍ଭର କରନ୍ତି (ଉଦାହରଣ ସ୍ୱରୂପ, ଚର୍ମର ତାପମାତ୍ରା କଙ୍କାଳ ମାଂସପେଶୀ ତୁଳନାରେ କମ୍ ହୋଇପାରେ | )କୋଷ ସଂସ୍କୃତି ପାଇଁ, ଅତ୍ୟଧିକ ଗରମ ଅପେକ୍ଷା ଅତ୍ୟଧିକ ଗରମ ଏକ ଗୁରୁତ୍ problem ପୂର୍ଣ୍ଣ ସମସ୍ୟା |ତେଣୁ, ଇନକ୍ୟୁବେଟରର ତାପମାତ୍ରା ସାଧାରଣତ the ସର୍ବୋଚ୍ଚ ତାପମାତ୍ରାଠାରୁ ସାମାନ୍ୟ ସେଟ୍ ହୋଇଥାଏ |
2.4.1 ବିଭିନ୍ନ ସେଲ୍ ରେଖା ପାଇଁ ସର୍ବୋଚ୍ଚ ତାପମାତ୍ରା |
ଅଧିକାଂଶ ମାନବ ଏବଂ ସ୍ତନ୍ୟପାୟୀ କୋଷ ଲାଇନଗୁଡିକ ସର୍ବୋଚ୍ଚ ଅଭିବୃଦ୍ଧି ପାଇଁ 36 ° C ରୁ 37 ° C ରେ ରଖାଯାଏ |
ଉତ୍କୃଷ୍ଟ ଅଭିବୃଦ୍ଧି ପାଇଁ କୀଟ କୋଷଗୁଡିକ 27 ° C ରେ ଚାଷ କରାଯାଏ;ନିମ୍ନ ତାପମାତ୍ରା ଏବଂ 27 ° C ରୁ 30 ° C ମଧ୍ୟରେ ତାପମାତ୍ରାରେ ସେମାନେ ଧୀରେ ଧୀରେ ବ grow ନ୍ତି |30 ° C ରୁ ଅଧିକ, କୀଟ କୋଷଗୁଡ଼ିକର ଜୀବନ୍ତତା କମିଯାଏ, ଯଦିଓ ଏହା 27 ° C କୁ ଫେରିଯାଏ, କୋଷଗୁଡିକ ପୁନରୁଦ୍ଧାର ହେବ ନାହିଁ |
ସର୍ବାଧିକ ଅଭିବୃଦ୍ଧିରେ ପହଞ୍ଚିବା ପାଇଁ ଆଭିଆନ୍ ସେଲ୍ ଲାଇନଗୁଡିକ 38.5 ° C ଆବଶ୍ୟକ କରେ |ଯଦିଓ ଏହି କୋଷଗୁଡିକ 37 ° C ରେ ରଖାଯାଇପାରିବ, ସେଗୁଡିକ ଅଧିକ ଧୀରେ ଧୀରେ ବ grow ିବ |
ଶୀତଳ ରକ୍ତ ପ୍ରାଣୀମାନଙ୍କଠାରୁ ଉତ୍ପନ୍ନ କୋଷିକା ରେଖା (ଯେପରିକି ଆମ୍ଫିବିଆନ୍, ଥଣ୍ଡା ପାଣି ମାଛ) 15 ° C ରୁ 26 ° C ମଧ୍ୟରେ ବ୍ୟାପକ ତାପମାତ୍ରାକୁ ସହ୍ୟ କରିପାରେ |
ପୋଷ୍ଟ ସମୟ: ଫେବୃଆରୀ -201-2023 |